Микрореакция преципитации отрицательная что это значит
Что такое микрореакция крови
Отборочный метод исследования крови для диагностики сифилиса называют микрореакцией преципитации. Он проводится для выявления в крови антител, которые представляют собой специфические белки, синтезируемые иммунной системой. Эти вещества выделяются при образовании в организме антигенов – липидных веществ из клеточных мембран, разрушенных бледной трепонемой (возбудитель сифилиса). Методика отличается простотой в использовании, быстротой проведения и низкими финансовыми затратами.
Виды анализа
Микрореакция относится к неспецифическим (нетрепонемным) методам исследования, потому что выявляет не возбудитель, а повреждение клеток. Их разрушение может возникать при других патологиях в организме. При положительном результате анализа назначают специфические серологические тесты, такие как ИФА (иммуноферментный анализ), РПГА (реакция прямой гемагглютинации), РИФ (реакция иммунофлюоресценции). Они позволяют напрямую выявлять содержание возбудителя сифилиса.
Выделяют микрореакцию преципитации нескольких типов.
Показания к проведению анализа
Исследование проводят для выявления возбудителей сифилиса среди больших групп населения. Главной целью анализа является массовость проведения скринингового теста для последующей диагностики в случае положительных результатов.
Кровь на микрореакцию назначают:
Метод широко используется для проведения контроля эффективности лечения. Микрореакция преципитации относится к достоверным методам выздоровления от сифилиса. Кроме того, количественный тест помогает корректировать дозировку препаратов или проводить их замену. Стоит отметить, что специфические серологические анализы не несут в себе такую информацию и дают положительные результаты после уничтожения возбудителя в организме.
Методика проведения и оценка результатов
Для исследования делают забор капиллярной крови из пальца, венозной крови из локтевой вены натощак или получают спинномозговую жидкость. Анализ проводят на стерильном обезжиренном стекле, куда помещают классический реагент (антиген), каплю сыворотки или плазмы. После тщательного перемешивания ингредиентов и добавления частиц угля при макроскопии следят за результатами реакции.
Возможность обнаружения иммунных комплексов при помощи микрореакции преципитации наступает через месяц после заражения. В процессе развития болезни концентрация антител нарастает. При скрытой форме и позднем сифилисе титр может быть невысоким, а иногда давать отрицательные реакции.
Ложные результаты анализа
В некоторых случаях кровь при обследовании дает ложные результаты. На это может влиять нарушение техники проведения теста. Некачественный забор исследуемого материала и его неправильное хранение, недостаточное перемешивание или загрязнение часто вызывают ошибочные реакции.
Ложноположительные результаты возникают при различных патологических и физиологических состояниях в организме. Поэтому весомое значение для верной трактовки микрореакции имеет выявление этих факторов. Ложноположительные результаты вызывают:
Ложноотрицательные результаты микрореакции образуются при высоком содержании иммунных комплексов в крови либо в первые недели заболевания при ничтожно малом количестве антител. В сомнительных случаях назначается консультация венеролога для осмотра кожных покровов и слизистых оболочек, проведение специфических серологических анализов.
Микрореакция преципитации крови считается эффективным скрининг-тестом для выявления сифилиса и контроля эффективности терапии. Она позволяет выявлять тяжелую патологию среди широких масс населения, назначать своевременное лечение, избегать развития запущенных форм заболевания.
Кровь на RW (реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, антитела IgG и IgM к Treponema pallidum)
Описание исследования
Характерные особенности сифилиса
Сифилис – хроническое инфекционное заболевание, поражающее многие органы и системы организма. Возбудителем инфекции является бледная трепонема. Окружающая среда для нее губительна, однако биологические жидкости и влажные среды – те убежища, которые позволяют бактерии чувствовать себя комфортно и безопасно. К таковым относится сперма, секрет влагалища, слизь, гной и т.п. Инфицирование сифилисом может происходить следующим образом:
Если организм поражен другими инфекциями, передающимися при половых контактах (например, герпесом, хламидозом, папиломовирусной инфекцией) или если при анальных контактах повреждена слизистая оболочка, это служит дополнительным фактором риска инфицирования сифилисом. У бледной трепонемы существует несколько антигенов, на которые организм вырабатывает антитела. Один из них имеет сходство с кардиолипином, применение которого позволяет обнаружить наличие антител к бледной трепонеме.
Любая фаза сифилиса является заразной, однако более всех отличаются в этом отношении первичная и вторичная стадии, если они сопровождаются наличием образований на коже и слизистых оболочках. Для попадания внутрь бледной трепонеме достаточно микроповреждений в коже или слизистой, откуда она стремится добраться в лимфатические сосуды, а затем и в лимфоузлы. После этого происходит распространение возбудителя по всему организму. Бледную трепонему может содержать слюна, грудное молоко, сперма и другие биологические среды инфицированного человека.
Продолжительность разных периодов сифилиса при классическом протекании заболевания следующая:
Первичная стадия характерна:
В конце первичной фазы происходит самопроизвольное заживление шанкра и переход лимфаденита в полиаденит (множественное воспаление лимфатических желез), длящийся до пяти месяцев.
Вторая фаза заболевания характеризуется масштабным высыпанием вторичных сифилид, которые появляются в несколько заходов, по 1,5-2 месяца каждый, а затем сами исчезают. Вторичные сифилиды полиморфны (имеют множество форм) – папулезные, пятнистые, пустулезные. Может появляться сифилитическое облысение (аллопеция), «ожерелье Венеры» (сифилитическая лейкодерма – многочисленные бесцветные пятна на шее). Второе полугодие вторичного сифилиса характеризуется исчезновением воспаления лимфатических желез.
Третичный период сопровождается образованием бугорков и гумм (третичных сифилидов). Он наступает в 40% случаев, когда болезнь не лечилась вообще или лечилась недостаточно. Периоды высыпания разделяются довольно длительными (иногда многолетними) промежутками времени, в которые инфекция никак себя не проявляет. Третичный сифилис сопровождается разрушением пораженных тканей и органов. Третичные сифилиды содержат совсем незначительное количество агентов инфекции, поэтому почти не представляют угрозы заражения. Иммунная система при этом «успокаивается», что делает возможным очередное инфицирование (возникновение ресуперинфекции).
Первые три года заболевания – это период, в который наиболее вероятно заражение плода. При беременности инфекция чревата:
Особенно опасны для плода пятый месяц беременности и процесс родов. Врожденный сифилис проявляется сразу после рождения и имеет признаки вторичного сифилиса. Поздний врожденный сифилис может проявиться в возрасте 5-17 лет и имеет признаки третичного сифилиса, характеризуемого триадой Гетчинсона:
Инфицирование сифилисом, как правило, подтверждается лабораторными тестами, однако, при наличии очевидных признаков, может быть доказано даже при отрицательных результатах исследований на характерные антитела.
Наиболее важно пройти диагностику следующим группам людей:
а) женщинам, планирующим стать матерью, т.к. возможны следующие варианты течения болезни:
б) беременным женщинам, т.к. своевременная диагностика и лечение в течение первых 4 месяцев беременности дадут возможность уберечь плод от заражения.
Данный тест объединяет два вида исследований:
Выявление суммарного количества антител классов IgG и IgM к Treponema pallidum может быть использовано двояко:
Появление первых признаков сифилиса или образование твердого шанкра являются предпосылкой для проведения лабораторного исследования, цель которого подтвердить факт инфицирования. Антитела обнаруживаются через три или в течение четвертой недели после образования первой сифилитической язвы. Первичная сифилома своим появлением знаменует начало первичной серопозитивной (т.е. характеризующейся продукцией антител) стадии сифилиса. Таким образом, данный специфичный метод позволяет достаточно рано диагностировать инфекцию.
Присутствие антител класса IgG может наблюдаться в организме человека достаточно долго, иногда всю оставшуюся жизнь.
Антитела классов IgG и IgM к кардиолипину являются иммунным ответом на высвобождение из повреждаемых сифилисом клеток липоидных и липопротеиноподобных элементов. Они выявляются у 70-80% обследуемых лиц с первичным сифилисом. Если болезнь находится во второй фазе или раннем «спящем» состоянии, они присутствуют практически в 100% случаев. Их исследование применяется для диагностики и контроля эффективности лечения сифилиса.
Как правило, реакция RPR бывает положительной через неделю-полторы после появления видимого знака первичного сифилиса – шанкра. Также результат теста бывает положительным через 3-5 недель после заражения. Вторая стадия сифилиса характеризуется снижением титра антител. При позднем сифилисе у 30% обследуемых по тесту RPR антитела вообще не обнаруживаются. Значительному уменьшению количества возбудителя способствует эффективная терапия (в течение года титр может снизиться в 4 и больше раз). В 90-98 % после проведение лечения результат теста – отрицательный.
Поскольку данное обследование не относится к специфическим, то не исключены ложноположительные реакции. Так как появление антилипоидных антител характерно не только для сифилиса, но и для других трепонемных инфекций, то они могут появляться как иммунный ответ на эти инфекции, особенно если таковые сопровождаются повреждением тканей (характерно для аутоиммунных заболеваний).
При получении положительного ответа на RPR-тест обязательно проводится осмотр дерматологом-венерологом, и повторно исследуется кровь.
Ложноотрицательные ответы RPR бывают крайне редко. Обычно они обусловлены эффектом «прозоны», возникающем в данном случае при наличии очень большого количества антител. («Прозона» в контексте анализа RPR – это «обратный эффект» при очень высоких титрах антител. Такое состояние может стать толчком для химических реакций, не имеющих отношения к исследованию, но меняющих оптическую плотность раствора. Итог – получение отрицательного показателя, как бы говорящего об отсутствии антител при их очень высокой концентрации фактически).
Подготовка к исследованию
Кровь на анализ сдается утром строго натощак, после 8-12 часового голодания. Накануне вечером исключить из рациона острую, жирную пищу, спиртные напитки.
Забор крови не осуществляется сразу после массажа, физиопроцедур, флюорографии, кольпоскопии, гастроскопии, биопсии, рентгеновского, мануального, инструментального, ректального, ультразвукового исследования, других диагностических и/или лечебных манипуляций.
Показания к исследованию
Исследование специфических суммарных антител IgG и IgM к антигенам бледной трепонемы назначается:
Исследование специфических суммарных антител IgG и IgM к кардиолипину проводится:
Интерпретация исследования
Тест является качественным.
Результат исследования суммарных антител классов IgG и IgM к бледной трепонеме описывается коэффициентом позитивности (КП):
КП = оптическая плотность конкретной пробы/пороговое значение
Универсальность коэффициента позитивности позволяет применять его при проведении всех иммуноферментных исследований. Данная величина отражает, насколько позитивен конкретный показатель анализа. Он дает возможность врачам более точно истолковывать полученные результаты. Концентрация антител и коэффициент позитивности – показатели, не связанные между собой, поэтому КП нецелесообразно применять для наблюдения динамики течения заболевания или действенности проводимого лечения.
Интерпретация полученного показателя:
Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном описывается формулировками: «отрицательная», «положительная».
Нормой в обоих исследованиях является отрицательный результат.
Положительный ответ свидетельствует:
Отрицательный результат может быть:
Сомнительным считается результат, когда невозможно вполне однозначно подтвердить наличие антител, характерных для присутствия в организме агента сифилиса. Для получения точного результата через полторы-две недели кровь на анализ отбирается повторно и еще раз исследуется.
Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:
Ф.И.О.: Сидоров Иван Петрович Пол: м Дата рождения: хх.хх.хххх
Дата забора биоматериала: хх.хх.хххх
Исследование
Результат
Нормы интерпретации
Примечание
[506] Кровь на сифилис (реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном, антитела IgG и IgM к Treponema pallidum)
Дата выдачи (дата исследования): хх.хх.хххх
Реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном
Антитела класса M и G к Treponema pallidum
Интерпретация результата осуществляется с учетом клинической картины, истории болезни пациента, а также показателей других лабораторных исследований.
Серологическая диагностика сифилиса
Наибольшее значение в лабораторной диагностике сифилиса имеет серологическая диагностика, целью которой является выявление антител к бледной трепонеме. Материалом исследования является сыворотка крови. Забор крови, для анализа на сифилис проводится натощак из локтевой вены. Все современные методы серологической диагностики сифилиса можно разделить на трепонемные и нетрепонемные.
Нетрепонемные тесты реакция Вассермана (реакция Вассермана (RW) имеет более чем столетнюю историю, в настоящее время ее отменили) и реакция микропреципитации определяют антитела к липоидному материалу, высвобождаемому из повреждаемых при сифилисе клеток макроорганизма, а не антитела непосредственно к бледной трепонеме.
Реакция микропреципитации (РМП), микрореакция, экспресс-метод диагностики сифилиса представляет собой реакцию преципитации на стекле. Как и в реакции Вассермана, используется кардиолипиновый антиген. Качественная оценка реакции производится по объему выпавшего осадка, величине хлопьев и так же обозначается в «плюсах». Для получения результата необходимо всего 10-40 минут. РМП несколько превосходит RW по чувствительности, но уступает по специфичности. За рубежом применяются аналоги РМП – RPR и VDRL. Реакция Вассермана и реакция микропреципитации в совокупности образуют комплекс классических серологических реакций (КСР). КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60-70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.
Достоинства классических серологических реакций: 1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод; 2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.
Недостатки классических серологических реакций: 1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»); 2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса; 3) Главный недостаток нетрепонемных тестов – недостаточная специфичность. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР).
Ложноположительные реакции могут быть обусловлены перекрестной реактивностью между бледной спирохетой и другими микробами, нарушениями липидного и белкового обмена, нестабильностью клеточных мембран, образованием аутоантител.
При анализе на сифилис ложноположительные реакции отмечаются при острых (малярия, инфекционный мононуклеоз и др.) и хронических (туберкулез, лепра, гепатит, боррелиоз и др.) инфекциях, инфаркте миокарда, циррозе печени, коллагенозах (особенно – при СКВ), онкопатологии, вакцинации, употреблении наркотиков, злоупотреблении алкоголем и жирной пищей. Ложноположительными могут быть КСР в последние недели беременности, после родов, а у некоторых женщин и во время mensis. Ложноотрицательные результаты КСР могут быть связаны с ВИЧ-инфекцией.
Наименее надежным методом диагностики сифилиса является реакция микропреципитации (РМП), которую нельзя применять как единственный метод для обследования доноров, беременных. При установлении диагноза сифилиса также обязательно подтверждение результатов РМП трепонемными тестами.
Трепонемные тесты на сифилис служат для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (особенно необходимо при диагностике скрытых форм), а также для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда КСР отрицательные.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – наиболее чувствительный метод в серологической диагностике сифилиса.
Специфичность РИФ также весьма высока. Принцип метода: к высушенным и фиксированным ацетоном к стеклу бледным трепонемам добавляется сыворотка крови больного. После промывания препарат обрабатывается сывороткой, содержащей антитела к антителам человека, меченные флюоресцином. Еще раз промывают препарат и смотрят его под люминесцентным микроскопом. Если в исследуемой сыворотке есть противотрепонемные антителафлюоресцины, будет отмечаться желто-зеленое свечение трепонем. Результаты оцениваются по степени свечения и обозначаются в «плюсах» (от + до ++++). РИФ становится положительной в первые дни первичного периода или даже в конце инкубационного периода и остается положительной во всех периодах (в том числе при поздних формах).
У РИФ есть несколько модификаций: РИФ10 более чувствительна, РИФ200 и РИФабс – более специфичны. С ликвором проводят РИФц. ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – наиболее специфичный метод в серологической диагностике сифилиса. Принцип метода: к живым трепонемам, полученным из тканей яичка кролика после искусственного создания специфического орхита, добавляют сыворотку крови исследуемого. При наличии в сыворотке противотрепонемных антител-иммобилизинов, бледные трепонемы прекращают движение (иммобилизируются).
Позитивность РИБТ оценивают при темнопольной микроскопии, исходя из процента трепонем, утративших подвижность: 51-100% – положительная, 31-50% – слабоположительная, 21-30% – сомнительная и 0-20% – отрицательная. Антитела-иммобилизины – поздние антитела, поэтому РИБТ становится положительной лишь в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса. В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса.
ЛПР при РИБТ отмечаются редко (при саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени). Ложноположительный результат РИБТ может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца. Достоинствами РИФ и РИБТ являются: 1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ); 2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).
Недостатки РИФ и РИБТ: 1) Техническая сложность, дороговизна методов. Особенно сложной является РИБТ, в настоящее время она применяется в основном для научных целей; 2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации; 3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение.
Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности. Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса.
Иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – новые высокочувствительные и высокоспецифичные, удобные в постановке (с возможностью автоматизации), хорошо воспроизводимые, недорогие методы серологической диагностики сифилиса. ИФА по механизму реакции, чувствительности и специфичности близок к РИФ. В обеих реакциях принимают участие одни и те же антитела. При ИФА для визуализации реакции антиген-антитело используют реакцию фермента (щелочная фосфатаза или пероксидаза хрена) с субстратом, который при этом меняет свою окраску. Интенсивность окраски определяет позитивность реакции (от + до ++++). Благодаря автоматизации, этот тест можно применять для скрининга на сифилис больших групп обследуемых: беременных, доноров, больных психоневрологических и кардиологических стационаров и др. Возможна постановка ИФА с ликвором. В настоящее время планируется замена комплекса КСР на сочетание РМП и ИФА.
Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах.
При постановке ИФА возможно выявление суммарных антител и дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG. IgM появляются в крови больных лишь в первые недели и месяцы болезни, а затем – исчезают. Поэтому, их выявление при ИФА свидетельствует о наличии ранних нелеченых форм сифилиса, раннего врожденного сифилиса, реинфекции. При выявлении IgG принципиальным является их количество, что отражается с помощью коэффициента позитивности (порядок величин этого показателя варьирует при применении разных тест-систем).
При РПГА в качестве антигена используются заформалиненные эритроциты барана, покрытые антигенами патогенных бледных трепонем. При добавлении к этим эритроцитам сыворотки, содержащей специфические антитела, происходит их агглютинация.
Результаты РПГА оценивают как реактивные, слабореактивные и нереактивные.
Помимо качественного исследования, во всех тест-системах предусмотрен количественный анализ с определением титра. Как и ИФА, РПГА проста в исполнении, не требует высокой квалификации персонала и специального оборудования, возможна ее автоматизация.
РПГА становится положительной уже в инкубационном периоде и может оставаться таковой спустя много лет после выздоровления (не может использоваться для контроля излеченности). По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.
ЛПР при постановке ИФА и РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, инфекционном мононуклеозе, лепре, а также у беременных. Ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Разрабатываются новые высокоспецифичные методы серологической диагностики сифилиса, такие как иммуноблотинг, IgM-серология и др.
Август Пауль фон Вассерман (Wassermann, August von) (1866–1925), немецкий микробиолог и иммунолог.
Родился 21 февраля 1866 в Бамберге. Учился в Страсбургском, Венском и Берлинском университетах, где его учителями были Р.Кох и П.Эрлих. С 1891 – ассистент Института Р.Коха, с 1901 – приват-доцент этого института, с 1902 – профессор. В 1911 Вассерман стал профессором Берлинского университета, в 1913 – директором Института экспериментальной терапии Фридриха Вильгельма в Берлине.
Основные труды ученого посвящены изучению антибактериального и антитоксического иммунитета при холере, тифе, дифтерии. Изучая эпидемию гриппа, Вассерман обнаружил явление относительного иммунитета. Доказал иммунологическую видоспецифичность белков (независимо от П.Уленгута). Предложил методы серологической диагностики туберкулеза.
Значительным достижением Вассермана стала разработка в 1906 (совместно с А.Нейссером и К.Бруном) метода диагностики сифилиса (реакция Вассермана).
Последние годы жизни занимался усовершенствованием серологической диагностики сифилиса, туберкулеза и новообразований.
Умер Август Пауль фон Вассерман в Берлине 16 марта 1925.
Клиника венерологии и дерматологии
Записаться на прием к врачу онлайн
Нажимая на кнопку «отправить заявку», Вы даете согласие на обработку своих персональных данных.
Мы гарантируем анонимность, неразглашение персональных данных и отсутствие рекламных рассылок по указанному вами телефону. Ваши данные необходимы для обеспечения обратной связи и организации записи к специалисту клиники.
Причин по которым пациенты не могут прийти в дерматологическую клинику очень много. Мы не будем их рассматривать, а просто предложим вызвать врача на дом или офис.
Вызвать врача на дом
Нажимая на кнопку «отправить заявку», Вы даете согласие на обработку своих персональных данных.
Мы гарантируем анонимность, неразглашение персональных данных и отсутствие рекламных рассылок по указанному вами телефону. Ваши данные необходимы для обеспечения обратной связи и организации записи к специалисту клиники.
Адрес венерологической клиники где можно пройти обследование, курс лечения, сдать анализы без очередей и анонимно
улица Большая Татарская, дом 35, строение 3
10 минут пешком от станций метро Павелецкая, Новокузнецкая, Третьяковская
Венерология
Дерматология
Микология
Онлайн запись
Все виды анализов
Сдать мазок на половые инфекции:
В любое удобное для вас время вы можете узнать все волнующие вопросы, касающиеся половых инфекций и не только, записавшись на прием к нашим специалистам. Результаты мазка готовы в вашем присутствии.
Сдать анализ крови на СПИД:
Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови, который будет готов в вашем присутствии.
Сдать анализ крови на сифилис:
Пациенты нашей клиники узнают результат анализа на сифилис в течении 10-15 минут.
Сдать анализ крови на гепатит В и С:
Врачи нашей клиники быстро и абсолютно безболезненно возьмут анализ крови на гепатиты В и С.
Сдать анализ крови на ВИЧ:
В течение 10-15 минут в нашей клинике вы можете провериться на ВИЧ и получить заключение врача.